TY - JOUR ID - 10.18307/2008.0517 TI - 原生动物单细胞PCR应用初探——以天蓝喇叭虫为例 AU - 刘志新 AU - 余育和 VL - 20 IS - 5 PB - 科学出版社 SP - 669 EP - 674 PY - JF - 湖泊科学 JA - UR - http://www.jlakes.org/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20080517&flag=1 KW - 单细胞PCR;单细胞全基因组扩增;原生动物;天蓝喇叭虫 KW - Single cell PCR;whole genome amplification;Protozoa;Stentor coeruleus AB - 以天蓝喇叭虫(Stentor coeruleus)为研究对象,探索了单细胞单基因PCR扩增及单细胞全基因组PCR扩增技术在原生动物中的应用.经过不断探索和优化条件后,试验取得了理想的结果.在40例单细胞单基因(SSU rDNA基因全序列)PCR的一次性扩增中,新鲜细胞和经过中性红染色的细胞都获得了100%的成功率,室温下酒精(95%)保存一周的细胞获得了82.5%的成功率.在单细胞全基因组PCR扩增中,采用高效高保真的phi29DNA聚合酶结合随机引物(Random Primer)进行扩增,获得了丰富且质量较高的PCR产物.以全基因组扩增产物(稀释10倍)对四个常用的基因位点(TEF1、SSU rRNA、18S-ITS1-5.8S、a-tubulin)进行扩增,均成功获得相应的基因片断. ER -